基于CDs的荧光探针在酒类等发酵食品检测中的研究进展及趋势
陈红琴, 严梦茹, 严恒, 李苑麟*, 黄永光*, 程玉鑫
贵州大学酿酒与食品工程学院, 贵州 贵阳 550025
*通讯作者 e-mail: ylli3@gzu.edu.cn; yghuang1@gzu.edu.cn

作者简介: 陈红琴, 女, 1995年生, 贵州大学酿酒与食品工程学院硕士研究生 e-mail: chq15186974484@163.com

摘要

发酵食品是人类食物链中不可或缺的一部分, 由于复杂的原料、 工艺以及菌株发酵等因素, 使得其风味成分快速直观分析以及有害物质测定、 假冒伪劣甄别存在一定的局限性。 碳点(CDs)是一类荧光纳米材料, 拥有良好的荧光特性、 优异的生物相容性、 生产简便以及可修饰等特点。 CDs荧光探针在食品风味检测、 食品中安全指标测定以及食品真伪鉴别等方面展示出巨大的应用潜力。 与大型检测仪器相比, CDs荧光探针对发酵食品的检测具有简便、 灵敏度高、 响应迅速等优点, 其可调荧光特性以及稳定的荧光信号输出, 可以对发酵食品中关键物质信息进行快速提取和转换, 结合化学计量法就能实现对发酵食品的快速原位检测以及真伪鉴别。 在此, 对CDs的制备、 光学性质、 形成机制做了简要概述, 并重点对CDs荧光探针在酒类发酵食品的风味成分分析、 有害物质检测, 以及非酒类发酵食品有害物质检测等领域进行了综述。 总结了CDs荧光探针在发酵食品检测中面临的挑战并进行了展望, 进一步拓展CDs荧光探针在发酵食品中的检测应用, 以期为CDs荧光探针在发酵食品检测领域的开发和应用提供参考。

关键词: 碳点; 荧光探针; 检测技术; 发酵食品
中图分类号:O657.3 文献标志码:R
Research Progress and Trends of CDs-Based Fluorescent Probes in the Detection of Fermented Foods Such as Alcoholic Beverages
CHEN Hong-qin, YAN Meng-ru, YAN Heng, LI Yuan-lin*, HUANG Yong-guang*, CHENG Yu-xin
College of Liquor and Food Engineering, Guizhou University, Guiyang 550025, China
*Corresponding authors
Abstract

Fermented food is an indispensable part of the human food chain. Due to complex raw materials, processes and strain fermentation, there are certain limitations in its rapid and intuitive analysis of flavor components, determination of harmful substances, and identification of counterfeit and inferior products. Carbon dots (CDs) are a fluorescent nanomaterial with good fluorescence characteristics, excellent biocompatibility, simple production and modifiability. As a type of detector, CDs fluorescent probes have shown great potential in food ingredient analysis, food safety detection, and food authenticity identification. Compared with large-scale detection instruments, CDs fluorescent probes have the advantages of simplicity, high sensitivity, and rapid response in the detection of fermented food. Their adjustable fluorescence characteristics and stable fluorescence signal output enable rapid extraction and conversion of key substance information in fermented food. Combined with chemical stoichiometry, they can achieve rapid in situ detection and authenticity identification of fermented food. Here, a brief overview is provided on the preparation, optical properties, and formation mechanism of CDs, with a focus on the application of CDs fluorescent probes in the analysis of flavor components, detection of harmful substances in alcoholic fermented foods, and detection of harmful substances in non-alcoholic fermented foods. Summarized the challenges faced by CDs fluorescent probes in the detection of fermented food and made prospects, further expanding the application of CDs fluorescent probes in the detection of fermented food, in order to provide a reference for the development and application of CDs fluorescent probes in the field of fermented food detection.

Keyword: Carbon dots; Fluorescent probe; Detection technology; Fermented food
引言

随着人们生活水平提高, 食品安全已成为全人类共识的安全问题。 化学污染、 生物污染、 食品掺假等问题已成为食品安全分析和质量评估的重点解决方向。 中国传统发酵食品, 包括白酒、 食醋、 酸汤等已成为老百姓日常消费品, 并形成重大产业。 由于复杂的原料、 工艺以及菌株发酵等因素, 使得发酵食品的风味和口感一直备受研究和关注。 然而, 由于现代分析技术的局限, 给发酵食品中关键风味物质、 功能物质以及有害物质的快速直观分析带来了一定的挑战。 发酵食品的常规检测方法, 如色谱法、 质谱法、 微生物法、 免疫测定法等, 对仪器和检测人员的操作水平要求较高, 前处理过程比较繁琐。 与传统检测方法相比, 基于碳点的荧光探针检测法具有检测快、 高效、 便捷、 操作简单等优点, 在发酵食品领域的应用优势特征更明显, 是目前极具潜力的热点方法。

碳点(carbon dots, CDs), 是一种直径在1~10 nm的准零维荧光纳米颗粒, 具有低成本、 水中溶解度高、 绿色环保、 制备原料丰富等优点, 常被应用于化学分析、 生物传感、 光电子学、 生物成像、 生物医药等领域。 由于CDs表面易于掺杂和功能化, 且具有丰富的官能团以及多维度结合位点等特点, 使得CDs具有可调荧光特性, 成为荧光探针传感领域中的理想材料。 CDs荧光探针的可调荧光特性以及稳定的荧光信号输出, 可以对发酵食品中关键物质信息进行快速提取和转换, 这对酒类等发酵食品中的重要特征成分与食品安全危害成分, 甚至“ 未知成分” 的探索具有十分重大的启示意义。 因此, 基于CDs的荧光探针在发酵食品分析中具有巨大的潜力, 能够满足发酵食品的快速检测需求和实时监测, 对于其质量的把控及溯源具有重要意义。

在过去的几年中, 尽管已经开发了大量的基于CDs的传感策略, 但较少有文献归纳酒类等发酵食品中CDs荧光探针的应用。 本文对CDs的制备、 光学性质、 形成机制进行了简要概述, 并重点介绍CDs荧光探针在酒类等发酵食品中的检测应用(见图1), 为CDs荧光探针在酒类等发酵食品检测领域的应用拓展提供参考, 以期对发酵食品的质量分析和快速检测提供一定的研究思路。

图1 CDs荧光探针的主要特性及在发酵食品分析中的实际应用示意图Fig.1 The main characteristics of CDs fluorescent probes and the practical application in the analysis of fermented food

1 碳点概述

碳点, 是一种尺寸在1~10 nm之间的准球形碳基纳米粒子, 具有小的高度碳化内核和聚合物表面基团。

1.1 碳点的合成

近几年, CDs合成原料的选择已逐步侧重于生物质的绿色资源, 其具备低成本、 可持续、 高产量、 环境友好等优势更受研究者青睐。 同时, 具备优异结构及天然可衍生的绿色碳点材料能够有效提高CDs的荧光性能。

表1 CDs合成技术比较[2, 3, 4] Table 1 Comparison of CDs synthesis technologies[2, 3, 4]

CDs的制备方式, 大致包括了自上而下法和自下而上法。 前者主要是将大分子碳材料(如石墨、 碳纤维、 碳纳米管等)逐步剥离、 切割、 氧化成小分子的碳纳米颗粒, 后者则是以小分子或低聚物为前驱体, 通过热解或碳化等手段, 将其聚合成更大分子量的碳点颗粒[1]。 自上而下法普遍具有操作繁琐、 设备条件苛刻、 原料昂贵不易获取等缺点, 限制了其在大规模生产中的实际应用。 相比之下, 自下而上法可以自由地选择经济绿色的前驱体, 通过合理的设计便可制备出尺寸合理和优异性能的CDs, 不仅可以实现低成本和大规模生产, 也更能贴近当今社会“ 绿色友好” 的发展主题(见图2)。

图2 CDs的合成示意图Fig.2 Schematic diagram of carbon dots synthesis

1.2 碳点的光学性质

光学性质是CDs最重要的性质之一, 主要涉及紫外-可见吸收特性、 荧光特性、 上转换发光性质以及电致发光特性、 磷光特性等。

1.2.1 紫外-可见吸收特性

CDs在紫外区显示出强的光吸收, 并逐渐衰减至可见光区, 通常在270~390 nm处有特征吸收峰。 一般认为, 这些吸收峰来源于C=O键的n—π * 跃迁, 或者C=C的π —π * 跃迁。 CDs的紫外吸收特性可通过表面掺杂、 改性、 钝化等方式进行改变。

1.2.2 荧光特性

CDs的光致发光过程是其开发为各种荧光检测器的主要理论依据之一, CDs的荧光发射容易受到多种因素的影响(见图3)。 一般而言, 通过采用氧化还原剂、 引入带电基团等方式造成CDs表面缺陷时可改变CDs的荧光性质。 此外, 大部分CDs会表现出对激发波长的依赖, 同时也显示了可调荧光发射特点。 但是, 部分CDs也会对于激发波长独立, 这可能是由于CDs表面缺陷以及表面态均匀分布所造成的发射位点单一所致[5]。 同样, CDs的荧光性质也表现出pH依赖性, 这可能与CDs表面基团的质子化与非质子化有关。

图3 CDs荧光性质的主要影响因素Fig.3 The main factors affecting the fluorescence properties of CDs

1.2.3 其他光学特性

近年, CDs因具有更多优异的光学性质而被广泛应用于各个领域, 如上转换发光性质、 电致发光特性、 磷光特性等。 其中, 上转换特性因其长波激发的较强组织穿透能力常被应用于生物成像探针领域。 电致发光特性则由于“ 电激发” 的现象在光电领域展现出独特的应用潜力。 此外, 室温磷光也是CDs最独特的性质之一, 目前已在生物成像、 数据加密和防伪、 光催化、 光学器件等领域广泛应用。

1.3 CDs荧光探针发光机理及检测

目前, 研究者广泛认可的CDs发光机制大致有三类: (1)表面态效应。 (2)量子限域。 (3)分子荧光。 物质检测的机理则是通过影响CDs的荧光发射行为来实现。 根据反应前后荧光信号的变化, 可将CDs荧光探针分为荧光猝灭型、 荧光强化型、 荧光恢复型以及比率型。 其中, 荧光猝灭机制主要包括荧光共振能量转移、 内滤效应、 聚集诱导猝灭、 光致电子转移、 静态猝灭、 动态猝灭; 荧光增强一般是聚集诱导发光; 荧光恢复则是由荧光猝灭恢复引起, 各自之间的区别如表2所示。

表2 CDs荧光探针的传感机理及特点[6, 7, 8] Table 2 The sensing mechanism and characteristics of CDs fluorescent probes[6, 7, 8]
2 CDs荧光探针应用于酒类等发酵食品的检测

发酵食品是指人们利用有益细菌进行生产制备的一类食品, 具有独特的风味和加工工艺。 近年来, 有不法商家会采用假冒伪劣的材料制作发酵食品, 通过以次充好、 从中作假、 对标签胡乱贴制等方式从中获取不正当利益。 不仅扰乱市场, 还严重危害消费者健康。 然而, 传统的检测技术依赖大型仪器设备, 不仅昂贵费时, 也不能深入剖析其质量内在特征及真伪鉴定。 因此, 利用CDs荧光探针建立发酵食品中表达质量的特征成分的快速、 高效、 准确、 普及性广的检测分析方法, 对实现传统发酵食品质量控制及其溯源具有重要意义。

2.1 CDs荧光探针应用于酒类发酵食品的检测

市场上的发酵酒类主要有白酒、 啤酒、 红酒、 米酒、 果酒、 奶酒、 黄酒等。 发酵酒中的风味成分含量和类型对酒的质量、 品牌、 等级等起着不可忽视的作用。 然而, 酒类中的风味成分种类多样、 含量较低, 且理化特性不同, 对其快速检测带来困难和挑战。

2.1.1 对酒类风味物质的检测应用

(1)白酒中风味物质的检测

当前, CDs荧光探针主要用于对白酒中关键风味物质进行分析并结合后者的分析结果对白酒的类型、 年份、 品牌进行鉴别, CDs优异的表面性质可以与白酒中的风味物质通过交叉反应形成独特的指纹图谱。 从已发表的文献上看, 研究者们主要是通过开发多组分的荧光传感器阵列, 利用CDs的比色和荧光信号, 分析样品和传感元件之间产生的差异性相互作用, 借助机器学习算法如主成分分析(principal component analysis, PCA)、 系统聚类分析(hierarchical cluster analysis, HCA)、 线性判别分析(linear discriminant analysis, LDA)、 偏最小二乘回归(partial least squares regression, PLSR)、 径向基函数神经网络(radial basis function neural network, RBFN)等方法进行辨别(如表3)。

表3 CDs荧光探针对白酒风味物质的检测应用 Table 3 Application of CDs fluorescent probe in the detection of flavor substances in Baijiu

表3可以看出, CDs荧光探针对白酒风味物质的检测中, 多以有机酸为检测指标。 作为白酒中的重要风味物质, 有机酸可以猝灭含氨基CDs的荧光, 因此, 可以利用富含氨基的CDs建立白酒中有机酸的定量分析技术。 Li等[10]结合LDA成功对5种浓度的8种有机酸进行了研究, 并由此对16种白酒进行了鉴别, 且有机酸的测定结果与白酒种类之间具有良好的相关性。 同样, 荧光传感器阵列对白酒中有机酸识别的功能在Zhang等[16]的研究中也被应用, 不同的是, 前者的研究是基于制备的三种CDs构成荧光传感器阵列, 而后者则是基于1种酸敏CDs(邻苯二胺)在3个不同波长下的三重荧光发射峰的基础上实现, 为CDs荧光探针对白酒风味成分检测提供了新的思路。

对于乙醇含量的检测, Arkin等[11]发现在不同的乙醇-水体系中不同的乙酸含量, 对CDs的猝灭程度不同, 从而建立了乙酸含量-CDs荧光猝灭程度的标准曲线, 再通过计算出的乙酸含量与水的添加量的标准曲线从而间接测定白酒中的乙醇含量。 与此不同的是, Tong等[15]通过研究CDs和金纳米颗粒(Au nanoparticles, AuNPs)在乙醇-水溶液中的生长和组装, 构建了一种直接检测白酒中乙醇含量的方法。 相比之下, Tong等的研究通过简单的比色反应, 就实现了乙醇含量的定量分析, 为乙醇检测提供了一种新颖的传感技术。

此外, Li等[12]合成的CDs传感器阵列结合PLSR及LDA技术成功对41种白酒的糠醛和有机酸进行了定量和识别, 并由此分析不同白酒的香型、 年份和质量, 实现了除了有机酸和乙醇外其他风味物质的检测。 Dai等[13]的研究进一步探索了CDs荧光传感器阵列对17种风味物质的响应, 结果该阵列对有机酸的响应最大, 其次是醛类和二酮, 而对大多数酯和醇没有表现出明显的反应, 该研究也揭示了目前CDs荧光探针对白酒风味物质检测的局限性, 无法普及到对白酒中其他风味物质的定量定性分析。

目前, 除了有机酸、 醇、 醛类之外, 其他风味物质与CDs荧光探针的反应规律性不强, 且灵敏度和特异性不够高。 随着纳米材料的发展, 相信可以不断改进CDs荧光探针以及荧光传感器的构建, 如制备CDs与AuNPs、 分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers, MIPs)、 共价有机金属框架(covalent organometallic frame, COF)等复合材料, 以增强探针的灵敏度和特异性, 进而实现在白酒中更多风味物质的快速检测和鉴别。

(2)其他酒类中风味物质的检测

CDs荧光探针在其他酒类中风味物质的检测指标主要侧重于生物活性物质, 如单宁酸(tannic acid, TA)、 槲皮素、 杨梅素等(如表4)。 这些活性物质不仅赋予发酵果酒一定的营养价值, 而且对酒的口感、 风味都具有重要的影响。

表4 CDs荧光探针对发酵酒中其他风味物质的检测应用 Table 4 Application of CDs fluorescent probes for detecting other flavor substances in fermented wine

CDs荧光探针作为发酵果酒中TA检测中的新颖方法, 常常结合化学发光的机理构建荧光探针检测器。 Li等[20]和Yang等[23]分别将所制备的CDs加入到H2O2-K3Fe(CN)6和H2O2-KMnO4的体系中, 参与化学发光反应, 而TA加入后可以明显降低化学发光体系的光强度, 从而构建了红酒中TA的检测方法。 值得一提的是, 两种方法在CDs的制备中应用了诸如三聚氰胺和甲醛以及铱酸和磷酸的有毒原料。 若能从绿色、 环保、 可持续的角度出发应用生物质基CDs, 将会是未来研发的新思路。 相对于TA的检测, CDs荧光探针对槲皮素的检测更为简便。 Guo等[24]将所开发的红色CDs(R-CDs)与智能手机结合, 基于槲皮素对荧光的猝灭机理, 利用智能手机记录不同浓度梯度的槲皮素致使R-CDs溶液发生的荧光变化, 将其转为RGB值后建立了其与槲皮素含量之间的线性关系, 并将其成功应用到了红酒中槲皮素的痕量测定。 然而, 这种基于智能手机的CDs基生物传感器在发酵酒的风味物质检测中较少看到相关报道, 相信基于智能手机辅助的CDs荧光传感器会成为发酵酒类中风味物质快速检测的优秀应用。

2.1.2 对酒类中有害物质的检测应用

通常, 酒类中的有害物质主要包括有甲醇、 氨基甲酸乙酯、 重金属、 组胺、 真菌毒素等, 建立更高效和便捷的有害物质检测技术对酒类的质量控制和监测具有重要意义。

(1)氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate, EC)

目前, CDs荧光探针已经实现对酒类样品中EC及其前体物质的监测。 Han等[25]利用MIPs形成CDs @MIPs光敏探针, 将其用于白酒、 黄酒和果酒中EC的检测。 结果显示, 该探针无需复杂的样品前处理, 对EC的回收率较高。 Meng等[26]结合仿生抗体(biomimetic antibody, BAs)技术形成CDs@BAs荧光探针, 并用于黄酒中EC前体物质尿素的捕获, 结果表明, 该探针对尿素的识别率为92.46%~108.79%, 对尿素途径中EC的抑制率为29.07%, 可见, 该探针对尿素的捕获不仅具有较高的选择性, 还能去除黄酒样品中有害物质。 两种方法从环保的角度出发以西瓜皮和柠檬籽作为碳源, 分别采用了MIPs和BAs技术模拟了“ 锁和钥匙” 的机制, 结合CDs荧光的可视化, 特异性地构造了针对EC的荧光传感器, 弥补了CDs无法特异性检测的缺点(见图4)。 但在“ 锁和钥匙” 的构建中, 需要克服模板分子和功能单体的交联。 尽管如此, CDs结合MIPs等特异性选择技术检测酒类中的EC仍然是目前具有巨大潜力的方法, 未来有望在CDs探针构建的便携式检测应用以及模板分子的高效洗脱方法中作进一步的研究。

图4 CDs荧光探针分别结合MIPs与BAs技术检测EC[25, 26]Fig.4 The CDs fluorescent probes detection of EC using MIPs and BAs techniques, respectively[25, 26]

(2)重金属离子

在重金属离子的检测分析上, CDs荧光探针的应用主要是针对Cu2+的检测。 Costa等[27]将菠萝汁CDs(FCD)结合功能化磁性纳米颗粒(functional magnetic nanoparticles, FMNP)和磁性固相萃取技术, 开发了一种测定葡萄酒中低浓度Cu2+的方法。 FMNP可以从葡萄酒中磁性提取痕量Cu2+, 并形成Cu-FMNP复合物, 用含有FCD的溶液洗脱Cu-FMNP络合物产生荧光Cu-FCD络合物, 从而能够对从葡萄酒中提取的Cu2+进行荧光测定, 该法无需使用复杂仪器, 大大降低了测量成本。 此外, Maia等[28]使用大米获得CDs, 基于Cu2+对CDs的荧光猝灭, 利用数字图像技术结合纸基传感器开发了一种使用智能手机判定甘蔗酒中Cu2+的检测方法, 该法的检测结果与传统的原子吸收光谱法没有差异。 从两种方法可知, CDs荧光探针可以实现酒中重金属离子低成本的现场分析, 其结果具有准确性和灵敏性。 遗憾的是, CDs荧光探针在酒类重金属的检测应用中并不广泛, 未来期望能开发酒样中更多种重金属离子的CDs检测方法。

(3)组胺

组胺(histamine, His)是导致食物过敏和中毒的主要因素之一, Zhang等[29]利用硫掺杂CDs(S-CDs)结合COF检测葡萄酒和发酵肉制品中的组胺, 检测限可达到5.3 μ g· kg-1, 基于S-CDs包埋COF的离子液体稳定的荧光探针, 可以有效提高探针的性能, 对食品中的小分子和有害物质的检测具有实用性。 然而, 该法容易受到生物物质的干扰, 且在尝试的酒类样品中, 仅对葡萄酒具有专一的检测特性, 无法普及到白酒等其他酒类。 近两年, Yang等[30]提出了一种基于表面增强的拉曼散射(surface-enhanced Raman scattering, SERS)检测米酒和发酵葡萄汁中His的新策略, 具体是将合成的CDs与AuNPs的组合, 其中, 前者对衍生化后的组胺表现出荧光敏化, 后者则可以通过由荧光基团间的能量转移而猝灭荧光, 进而增强SERS信号(见图5)。 有趣的是, 在这两种方法中, Zhang是基于组胺对CDs的荧光猝灭来实现的, 而Yang的研究中CDs与衍生化后的组胺具有敏化效应, 表明了对样品进行适当处理后可以转换其荧光性能, 打破了His对荧光猝灭的“ 固有印象” , 且检测对象扩展到了米酒、 发酵葡萄汁和芒果汁, 这在其他有害物质的检测思路上具有一定的借鉴意义。

图5 CDs对米酒和发酵葡萄汁中His的检测技术[30]Fig.5 Detection technology of His in rice wine and fermented grape juice by CDs[30]

(4)真菌毒素

真菌毒素来源于各种真菌在适宜的环境温度和湿度条件下繁殖而产生的一系列次级代谢产物, 而酿造酒的各种原料在生长、 加工和储存过程中容易受到真菌的污染。 目前, CDs荧光探针在酒类中的检测主要集中在赭曲霉毒素(ochratoxin, OTA)。 Zhan等[31]合成了巯基功能化CDs(SH-CDs), 在氧化还原条件下巯基发生快速、 高效及可逆地转化, 从而诱导SH-CDs荧光强度和吸光度的双模变化。 在此基础上, OTA触发杂交链式反应和酶促反应, 与SH-CDs相结合后便可对OTA进行双模式测定, 该法可在2.0~5.0 nmol· L-1区域内, 和OTA的含量之间表现良好的线性关系, 不仅成功应用于实际红酒样品中OTA含量的检测, 还弥补了CDs不可回收的缺点。 可见, CDs对OTA的检测需结合DNA的核酸适配体, 在放大检测信号的同时具备DNA特异的识别能力[32]。 但在其检测方法中采用绝对荧光强度来表示OTA的响应信号, 容易受到环境和食品基质的影响。 在此基础上, Du等[33]利用了DNA熵驱动放大器和纳米粒子扩增的信号放大优势, 开发了基于FRET的CDs比例荧光传感器。 相较于前两种研究, 该法对OTA的检出限值可低至0.006 pg· mL-1, 从而可以进行对OTA的超灵敏测试。 尽管CDs探针对OTA的检测取得了进展, 但其检测体系构建较为复杂, 且CDs荧光探针检测酒类中其他真菌毒素的研究迄今为止未见报道。

(5)其他有害指标

CDs荧光探针还被应用于发酵酒类中甲醇[34]、 乙醛[35]以及亚硫酸氢盐[36]的检测分析。 对于甲醇的检测, Thongsai等[34]利用稻壳合成碳点, 并将其集成到光学电子鼻中用于检测酒精蒸汽和挥发性风味物质(volatile flavor substance, VOC)。 作为电子鼻系统中的传感探针, 该系统除了能对甲醇和乙醇蒸汽传感之外, 对于丙酮, 乙醚, 甲苯, 二氯甲烷和己烷等VOC都具有较好的传感效应。 CDs荧光探针基于蒸汽和VOC的传感在酒类挥发性物质的检测中具有极大的吸引力, 其特异性相较普通的检测方法更高。 若能在此基础上简化电子鼻系统, 无疑为其他发酵蒸馏酒中的挥发性物质和有害成分的检测提供巨大的参考价值。

2.2 CDs荧光探针应用于其他发酵食品的检测

除酒类发酵食品外, 酸奶、 干酪、 酒酿、 泡菜、 酱油、 食醋、 豆豉等都是生活中常见的发酵食品。 当前, CDs荧光探针对其他发酵食品的检测主要是针对有害物质, 对风味物质的研究较少(见图6)。

图6 CDs荧光探针在其他发酵食品的应用Fig.6 Application of fluorescent probes in other fermented foods

2.2.1 有害物质

近年来, CDs荧光探针已逐步应用于发酵食品中生物胺(biogenic amine, BAs)的检测应用, 如奶酪中的酪胺[37]、 火腿和香肠中的色胺[38]、 米醋中的酪胺[39]、 酸奶中的组胺[40, 41]等。 绝大多数的CDs荧光探针是在结合MIPs的基础上进行检测分析。 MIPs可以特异性地捕获有机小分子, 当与CDs荧光探针结合时可以赋予后者高度的专一性。 此外, Liao等[40]将CDs与呈现过氧化物酶活性的普鲁士蓝纳米颗粒(prussian blue nanoparticles, PBNPs)结合, 形成具有双波长荧光强度变化的比例荧光探针的免疫测定法(见图7)。 PBNPs作为一种纳米酶可以有效地避免酶的失活, 并且比率荧光传感器的构建使得结果更具稳定性和抗干扰特性, 这种基于CDs比例荧光策略与免疫测定结合的方法可以为食品安全检测提供了一个更强大的平台。

图7 PBNP介导的组胺比例荧光免疫测定的示意图[40]Fig.7 Schematic representation of PBNP-mediated fluorescence immunoassay of histamine proportion[40]

CDs荧光探针也可检测白面包中的丙烯酰胺[42]、 泡菜中的亚硝酸盐[43, 44]、 酱油中的三氯丙醇(trichloropropanol, 3-MCPD)[45, 46]等有害物质。 值得讨论的是, 对3-MCPD的检测, Fang等[45]将CDs直接印入滤纸中以提供高荧光强度, 并在CDs纸上合成MIP膜以选择性提取3-MCPD。 这种基于纸张和MIPs相结合的技术为3-MCPD的检测提供了一种有前途的策略, 且该法成本低、 易于使用和便携性, 对其他食品添加的测定具有重要的参考价值。

2.2.2 食品添加剂

近年, 由于有不良商家违规超量加入食品添加剂, 造成食品安全事故屡见不鲜。 因此, 建立高效快速的食品添加剂的检测技术对食品安全有着重大作用。 CDs荧光探针已经具备识别腌制橄榄中的抗坏血酸、 山梨酸钾、 柠檬酸、 乳酸和苯甲酸钠[47]、 面包中的硼砂[48]、 发酵乳中的抗生素和亚硝酸盐[49]以及番茄酱中的苏丹红[50]等基本能力。 Zuo等[49]的研究将铁掺杂碳点(Fe-CDs)、 磁性Fe3O4纳米粒子与聚多巴胺(PDA)纳米复合材料(MNPs@PDA)相结合, 形成Fe3O4@PDA NPs的生物传感器。 该传感器能够有效检测发酵乳中的卡那霉素(kanamycin, KAN)和亚硝酸钠(NaNO2)。 其中, Fe-CDs不仅赋予了传感器光致发光特性, 而且由于Fe的掺杂从而具有出色的过氧化物酶样活性, 该活性可以诱导NaNO2发生重氮化反应。 其次, Fe3O4@PDA NPs表现出的磁分离特性可以有效地吸附KAN。 因此, 该法的建立能够迅速检测乳制品中的有害成分, 这对其他发酵食品的日常监测和食品质量安全控制具有重要的启示意义。

3 结论与展望

综上可见, CDs荧光探针在白酒、 红酒、 葡萄酒等酒类发酵饮料, 以及食醋、 酱油、 酸奶、 面包等非酒类发酵食品中的应用具有巨大的前景。 相对于传统检测方法, 基于CDs的荧光检测法展现出快速、 高效、 便捷、 响应快、 操作简单等特点, 不仅简化了样品的前处理过程, 其检测过程也逐步从可视化的荧光光谱分析逐步向便捷式的智能设备或传感器阵列发展, 应用发展势头迅速。 这对日后开发新的发酵食品快速检测方法有着重要的意义。

尽管CDs荧光探针展现出优越的检测优势, 但对种类较多的物质进行检测时仍然显得“ 寡不敌众” 。 一方面既要提高探针检测的灵敏度和特异性, 另一方面, 实现探针的多功能、 可回收应用仍然是当前极具挑战的课题。 此外, 在CDs荧光探针的构建中, 虽然逐步结合其他技术提高了探针的灵敏度和特异性, 但在其构建上不免暴露了制备体系复杂的缺点。 并且, 从检测的范围上看, CDs荧光探针对发酵食品中有害添加剂、 异味物质以及其他特征风味成分的检测应用较少。 因此, 随着样品检测需求日益增加, 基于CDs的荧光探针依然面临巨大的挑战, 主要体现在: (1)绝大多数的CDs荧光探针检测功能单一, 仅能得到发酵食品中单因子指标检测结果。 因此, 开发多功能、 多种指标成分同时检测的CDs荧光探针是未来发展趋势。 (2)CDs荧光探针可检测的发酵食品种类较单一, 在食醋、 酸汤、 酱油等非酒类发酵食品领域的应用相对较少, 未来可拓展CDs荧光探针在非酒类发酵食品检测的应用。 (3)CDs荧光探针在复杂发酵食品体系中的应用较少, 复杂体系的组分如何与CDs表面基团相互作用值得进一步探究。 (4)CDs荧光探针在白酒领域中的应用仍然停留在初步探索阶段, 检测指标也只局限于白酒中的有机酸、 糠醛、 酮、 乙醇等, 更多特征成分的检测方法仍有待挖掘。 (5)大多数CDs荧光探针无法回收再利用, 且其体系构建越来越复杂。 因此, 从绿色、 可回收的角度简化CDs荧光探针的构建是今后发展的趋势。

总之, 基于CDs荧光探针的方法仍然是当前检测发酵食品的前沿方法, 未来有望在更多发酵食品领域实现风味物质的鉴定、 有害成分的分析以及发酵工艺的实时监测等应用。

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